مشاهده و ردیابی آنزیم های خاص در مخلوط های پروتئینی با روش های بیوشیمیایی

پایان نامه
  • وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه
  • نویسنده مینا مهری کا کاوند
  • استاد راهنما
  • سال انتشار 1392
چکیده

مخلوط های پروتئینی (مانند عصاره ها و استخراجهای بافتی و سلولی) ترکیبات پیچیده ای هستند که همین پیچیدگی بررسی متمرکز بر روی جزئ یا اجزا خاصی از این مخلوطها را با دشواری روبرو می سازد. مرسوم است که طی مراحل متعدد خالص سازی از پیچیدگی آن کم می شود یا جزء کاملا خالص می شود و سپس بررسی های دلخواه روی نمونه خالص (یا نیمه خالص) انجام می شود. اما مراحل تخلیص وقتگیر، پرهزینه و دشوار هستند. ضمنا این شبهه وجود دارد که آیاجزء خالص شده از نظر ساختار و/یا عملکرد مانند همین جزء، قبل از جداسازی است یا در اثر عملیات تخلیص دچار تغییراتی در ساختار یا عملکرد شده اند. گرچه معمولا از این شبهه صرف نظر می گردد ولی برای برطرف کردن آن تلاش می شود. دراین پایان نامه از انواعی از تکنیک های الکتروفورز یک بعدی (1d) یا دوبعدی (2d) برای بررسی پروتئومها استفاده شده است که در بعد اول آنها کمترین دستکاری در ساختار پروتئین ها اعمال می شود بطوریکه گرفتن فعالیت از آنزیم خاصی در ژل امکانپذیر باشد. به این ترتیب امکان تخمین جرم مولکولی آنزیم مورد نظر در بعد دوم وجود دارد. در فاز اول این پژوهش، از 1d-cn-page برای نشان دادن تغییرات ساختاری در آنزیم کاتالاز موجود در پروتئوم درون سلولی باکتری kocuria asb 107 استفاده شد ، در فاز دوم این پژوهش، پروتئوم درون سلولی باکتری kocuria asb 107 با دو روش الکتروفورزی 2d-cn-sds-page وهمچنین 2d-bn-sds-page مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. در هر دو این روشها پیش از بعد دوم موقعیت آنزیم کاتالاز با روش تشخیص ویژه کاتالاز در بعد اول تعیین شد. در مورد آنزیم (های) تجزیه کننده زانتان از روش مقایسه پروتئوم استفاده شد. ابتدا پروتئوم خارج سلولی باکتری paenibacillus sp.sm0 که در دو دمای مختلف 20 و 35 درجه سانتیگراد رشد داده شده بودند، به روش 2d-cn-sds-page مورد آزمایش قرار گرفتند. پس از رنگ آمیزی با نیترات نقره، لکه (های) متفاوت در طرح های پروتئومی حاصل به عنوان کاندیداهای اصلی آنزیم (های) تجزیه کننده زانتان هستند. جرم مولکولی آنها تخمین زده شد . در مجموع این نتایج نشان داد در بعضی موارد ، روش های پروتئومیکس می توانند اطلاعاتی درباره یک آنزیم خاص یا یک فعالیت خاص در پروتئوم به ما بدهند بدون آنکه لازم باشد لزوما از روش های پیچیده ای مانند mass spectroscopy برای شناسایی و تعیین هویت لکه های پروتئینی استفاده کرد.

منابع مشابه

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

متن کامل

اثر بربرین در تنظیم آستروسیتهای Gfap+ ناحیه هیپوکمپ موشهای صحرایی دیابتی شده با استرپتوزوتوسین

Background: Diabetes mellitus increases the risk of central nervous system (CNS) disorders such as stroke, seizures, dementia, and cognitive impairment. Berberine, a natural isoquinolne alkaloid, is reported to exhibit beneficial effect in various neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Moreover astrocytes are proving critical for normal CNS function, and alterations in their activity...

متن کامل

آنزیم های غیر پروتئینی: RNA می تواند به عنوان آنزیم عمل کند

Within the past few years, neat scheme has been overturned by the discovery that RNA can act as an enzyme. What does the starting finding of RNA enzymes imply? Thre first implication is that one can no longer assume a protein lies behind every catalytic activity of the cell. It now appears that several of the operations that tailor an RAN molecule into its final form are at least in part cataly...

متن کامل

اثر مکمل عنصر روی و ویتامینE بر آنزیم های آنتی اکسیدان، هورمون های جنسی و برخی فراسنجه های بیوشیمیایی در گله های مادر بلدرچین ژاپنی

به منظور بررسی تاثیر اثر مکمل عنصر روی (اکسید روی) و ویتامین E (آلفا – توکوفرول استات) بر فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان، هورمون های جنسی و فراسنجه های خونی، از960 قطعه بلدرچین ژاپنی در سن 70 روزگی برای مدت 10 هفته با جیره پایه، براساس ذرت و سویا تغذیه شدند. در طول آزمایش، مصرف آب و غذا به صورت آزاد بود. مجموعا 10 تیمار با 4 تکرار و هر تکرار شامل 16 قطعه بلدرچین ماده و 8 قطعه بلدرچین نر نگهداری ...

متن کامل

ویژگی های مکانیکی نانوکامپوزیت های پلی پروپیلن ـ خاک رس تهیه شده با روش مخلوط مذاب

ویژگی‌های مکانیکی از پارامترهای مهم در تهیه نانوکامپوزیت‌ها می ‌باشند. بررسی ویژگی‌های مکانیکی اطلاعات مفیدی در مورد اثر سازگارکننده ها و نانوکلی و روش فرایندی می ‌دهد. در این کار پژوهشی، خواص مکانیکی نانوکامپوزیت‌های تهیه شده با خاک رس C15A و اولیگومر pp-g-MA با خواص مکانیکی نانوکامپوزیت‌های تهیه شده توسط دیگر پژوهشگران مقایسه  شده است....

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023